荧光物质测定仪操作流程详解:
一、样品准备与装载
1.样品预处理
根据样品类型(液体、固体或薄膜)选择合适的处理方式:
液体样品:需过滤去除颗粒物,避免干扰荧光信号;若为高浓度样品,需用溶剂稀释至线性检测范围内。
固体样品:研磨成均匀粉末后溶解于适量溶剂,或直接压片制成透明薄片。
生物样品(如细胞):需通过裂解液释放荧光物质,离心后取上清液。
关键点:确保样品无自发荧光杂质(如某些塑料容器),建议使用石英比色皿或专用样品盘。
2.装载样品
打开ZW-3样品室舱门,将预处理后的样品注入专用样品盘。
关闭舱门时避免震动,防止样品溅出或位置偏移。
注意事项:若测量挥发性样品,需在密闭环境中操作以减少损失。
1.光源选择与校准
根据荧光物质激发波长选择光源类型:
氙灯:适用于宽波段激发,需预热10-15分钟以达到稳定输出。
LED光源:波长特异性高,无需预热但需确认与样品激发峰匹配。
调整光源强度:初始设置为中等强度,后续根据荧光信号强度微调,避免光漂白或检测器饱和。
2.检测器参数优化
灵敏度设置:
高浓度样品:选择低灵敏度档位,防止信号溢出。
低浓度样品:启用高灵敏度档位,配合增益调节提升信噪比。
积分时间:根据荧光衰减特性设置,长寿命荧光物质需延长积分时间。
校准步骤:运行空白样品(纯溶剂)扣除背景噪声,确保基线稳定。
3.波长扫描设置(可选)
若需分析荧光光谱,设置激发波长范围和发射波长范围,仪器将自动扫描并生成光谱图。
三、荧光物质测定仪测量与数据采集
1.启动测量
在控制软件中点击“开始”按钮,ZW-3将按预设参数执行以下操作:
光源激发样品,检测器实时采集荧光信号。
系统自动扣除背景噪声,生成原始数据曲线。
动态监测模式:对光稳定性差的样品(如某些染料),可设置连续测量间隔,观察荧光强度随时间变化。
2.实时监控与调整
观察软件界面中的荧光强度曲线,若信号波动超过5%,需检查:
样品是否均匀分布。
光源是否稳定(通过内置参考光强计确认)。
检测器是否过热(需暂停测量冷却)。
根据实时数据微调参数(如降低光源强度或缩短积分时间)。
四、荧光物质测定仪数据处理与分析
1.荧光强度计算
仪器自动应用预设公式计算结果。
相对定量:以标准品为参照,计算样品相对荧光强度。
多波长分析:对光谱数据拟合高斯曲线,确定最大发射波长和半峰宽。
2.结果输出与存储
打印报告:选择“导出”功能生成PDF或Excel文件,包含样品信息、参数设置、荧光曲线及计算结果。
数据备份:将原始数据和处理后的数据保存至指定文件夹,建议按日期-项目名分类存储。
高级分析:通过配套软件进行动力学拟合(如一级反应速率常数计算)或主成分分析(PCA)。
